博萊霉素的試驗(yàn)要點(diǎn)本篇告訴你
更新時(shí)間：2021-06-17 | 點(diǎn)擊率：2339
博萊霉素與鐵的復(fù)合物嵌入DNA，引起DNA單鏈和雙鏈斷裂。不引起RNA鏈斷裂。作用的第1步是本品的二噻唑環(huán)嵌入DNA的G-C堿基對之間，同時(shí)末端三肽氨基酸的正電荷和DNA磷酸基作用，使其解鏈。作用的第二步是本品與鐵的復(fù)合物導(dǎo)致超氧或羥自由基的生成，引起DNA鏈斷裂?？诜o效，需經(jīng)肌內(nèi)或靜脈注射。
博萊霉素的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1、CTAB溶液在低于15℃時(shí)會析出沉淀，因此在將其加入冷凍的植物材料中之前必須預(yù)熱。
2、在適條件下，DNA—CTAB沉淀呈白色纖維狀，很容易一下子就從溶液中鉤出。不過，某些植物種的DNA沉淀中可能含有雜質(zhì)，特別是多糖，使DNA沉淀呈絮狀或膠狀，這種情況下可能需要稍事離心才能得到DNA.—CTAB沉淀。
3、飽和酚雖然可有效地使蛋白質(zhì)變性，但酚不能*抑制RNA酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和L仿的混合液，可減輕這兩種現(xiàn)象，同時(shí)可加入適量的異戊醇(苯酚—L仿—異戊醇=25:24:1)，異戊醇的作用是消泡，并使蛋白質(zhì)層緊密，使水相和有機(jī)相分層較好。
細(xì)菌的培養(yǎng)和收集將含有質(zhì)粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃培養(yǎng)12-24小時(shí)。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5mlLB液體培養(yǎng)基(含50μg/mlAmp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時(shí)至對數(shù)生長后期。
非凍型組織RNA保存液小量提取法對于從大量轉(zhuǎn)化子中制備少量部分純化的質(zhì)粒DNA十分有用。這些方法共同特點(diǎn)是簡便、快速，能同時(shí)處理大量試樣,所得DNA有一定純度,可滿足限制酶切割、電泳分析的需要。
博萊霉素特點(diǎn)如下：
1、非凍保存提取RNA用的新鮮組織，在37℃下可保存1天，25℃下可保存1周，4℃下可保存1月，在-20℃或-80℃下可長期保存。其間樣品可反復(fù)凍融十多次。
2、應(yīng)用范圍廣，可用于保存，郵寄和運(yùn)輸病毒、細(xì)菌、果蠅、植物組織、動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞、懸浮細(xì)胞(白細(xì)胞、流式細(xì)胞儀收集的細(xì)胞)等。
3、兼容性廣，RNALOCKER保存的樣品可以直接用于RNA提取也可直接用于組織切片、免疫學(xué)和流式細(xì)胞分析。
4、結(jié)果準(zhǔn)確，本產(chǎn)品進(jìn)入細(xì)胞后能迅速鎖定RNA水平，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更能準(zhǔn)確反映取樣時(shí)基因表達(dá)譜的真實(shí)狀態(tài)。
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